PacBio SMRT测序:
单分子测序被称为第三代测序技术,其DNA分子在测序时,无需PCR扩增,实现了对每一条DNA分子的单独测序。单分子荧光测序(PacBio)和单分子纳米孔测序是三代测序的代表技术。
美国太平洋生物公司(Pacific Biosciences,PacBio)开发的三代测序技术称为SMRT测序(Single Molecule Real-Time Sequencing),该技术建立在两项革命性的发明基础之上,从而攻克了测序领域的重大难题。第一,零模波导孔技术(Zero-mode Waveguides,ZMWs)使激发光被限定在单分子纳米孔底部一定范围内,过滤了背景噪音。第二,荧光基团结合在核苷酸的磷酸基团上,帮助DNA聚合酶完成一个全天然的DNA链合成过程。
SMRT cell ZMWs 荧光基团
PacBio SMRT技术优势:
l 长读长(平均读长15 Kb以上)
l 无需PCR,均匀覆盖基因组(包括高GC/Poly-A)
l 准确度在30×可达99.999%,随机误差可通过增加测序深度消减
l 测序的同时直接得到碱基修饰的信息
l 无需拼接即可完全测通全长转录本
PacBio测序平台比较:
PacBio RS II测序仪 PacBio Sequel测序仪