16S rDNA基因长度约为1.5kb,包含保守区和高变区,保守区在菌种间差异不大,可反映物种间的亲缘关系,高变区具有种属特异性,根据物种亲缘关系不同而有一定的差异,因此16S rDNA已经广泛应用于菌种鉴定和系统发生学研究。
传统扩增子测序仅针对单个或连续的两到三个可变区进行分析,而基于三代测序平台PacBio的全长16S 扩增子测序可获取16S rDNA全长序列,突破了二代测序读长较短的局限性,提高了菌株在种水平的分辨能力。全长扩增子测序能够获得全部变异区域序列信息,不仅能提高物种鉴定的分辨率¹,还能提高样本中微生物组成鉴定的精确性和全面性²,从而更加真实的还原样本中微生物群落结构。
01 送样要求
类型 |
要求 |
土壤、淤泥、沉积物 |
≥10g |
粪便 |
≥5g |
组织样本 |
≥3g |
发酵液、瘤胃液 |
5ml左右(离心有明显沉淀) |
水体、其它液体 |
滤膜3张(直径3-4cm) |
拭子 |
5个以上 |
DNA:浓度≥10 ng/uL,总量≥200 ng,DNA要有明显主带,无降解,无RNA、蛋白质等杂质污染
PCR产物:浓度≥50 ng/uL,总量≥600 ng,确保条带单一,无降解,无引物二聚体
测序平台 |
数据量 |
PacBio Sequel |
≥5000条CCS |
04 主要结果展示
目的:对每个样本/分组进行微生物种类和丰度的注释,可以直观了解微生物的组成和相对丰度,以便分析和探讨在不同样本/分组间优势菌群的差异。
多样性分析
目的:图3反映测序数据量的合理性并间接反映样品中物种的丰富程度。图4可展现样本间/组间的微生物组成差异大小。
统计分析
目的:使用统计学方法分析寻找组间差异的物种,筛选出具有代表性的biomaker,作为识别不同类群的生物学标识。
功能预测
目的:对样本中的微生物群落进行功能预测,为深入了解群落结构和文章发表锦上添花。
05 应用领域
菲沙基因,从样本提取到生信分析,项目经验丰富,全方位提供微生物测序分析服务,为您解决各种生物学问题,满足您多样化的科研需求!
参考文献
1: Pootakham W, Mhuantong W, Yoocha T, et al. High resolution profiling of coral-associated bacterial communities using full-length 16S rRNA sequence data from PacBio SMRT sequencing system[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):2774.
2: Singer, E., Bushnell, B., Coleman-Derr, D., Bowman, B., Bowers, R.M., Levy, A., Gies, E.A., Cheng, J.-F., Copeland, A., Klenk, H.-P., et al. (2016). High-resolution phylogenetic microbial community profiling. ISME J 10, 2020-2032.