Hi-C技术因能获得全基因组序列在空间中的互作信息,被广泛应用于基因组辅助组装和三维结构互作研究中,但其对细胞起始量的要求较高,通常需要百万级别的细胞量。高起始细胞量限制了一些来源有限或比较珍贵的材料,如动物胚胎、神经元、植物根尖、临床组织样本等,因此降低Hi-C所需的起始细胞量愈显必要。
之前因材料有限无法进行Hi-C的老师们,现在有好消息告诉大家啦,菲沙基因紧跟技术发展趋势及结合市场需求,已成功开发出了低起始量的Hi-C建库方法,5千个细胞即可成功建库!细节且看下文:
我们以某动物细胞样本(基因组大小780Mb)进行测试,首先对10^6个细胞的常规起始量进行Hi-C建库,并进行小数据量测序评估文库质量,数据质控结果合格,有效数据率高达68%。
互作热图的结构清晰,如下所示:
02-我们的低起始量测试
接下来使用相同的材料,以不同的起始量(10^5个、10^4个、5x10³个细胞)分别进行Hi-C建库测试,结果发现小数据量质控结果均合格且数据的重现性非常好。酶切率均在90%以上,有效数据率均达到60%左右。
这些结果与常规起始量的Hi-C建库结果相当,且互作热图的结构也清晰可见。
低起始量Hi-C互作热图展示:
低起始量Hi-C互作图谱(10^5个细胞)
低起始量Hi-C互作图谱(10^4个细胞)
低起始量Hi-C互作图谱(5x10³个细胞)
03-我们的低起始量方法与已发表的方法进行结果比较
我们在进行低起始量Hi-C建库的同时,以相同起始量细胞,采用了已发表的Low input Hi-C方法(Díaz N, et al. Nature Communication, 2018)进行建库,小数据量质控结果如下:
结果显示:本次实验以相同的起始量,菲沙基因的低起始量Hi-C建库结果明显优于采用Low input Hi-C方法的建库结果。
目前,低起始量的某动物胚胎组织和某植物根部组织项目已成功交付!
菲沙基因已成功交付的低细胞量Hi-C项目数据质控结果
5千个细胞起始量不是我们的终点,更低起始量的Hi-C建库正在突破中.........
与低起始量的研发同步,菲沙基因进行了Hi-C试剂盒(Frasergen Hi-C Kit)的研发,目前各项测试结果显示正常,并且我们使用此试剂盒,对同一个样品进行了低起始量的Hi-C建库,最终小数据量的质控结果也是合格的,这充分说明菲沙基因低细胞量Hi-C建库的方法成熟且结果稳定。
Frasergen Hi-C Kit的数据质控结果
采用Frasergen Hi-C Kit的Hi-C互作图谱(2x10^5个细胞)
04-总 结
(1)菲沙基因已完成低细胞量Hi-C建库,低至5千个细胞可成功交付!
(2)更低细胞量(一千个细胞及以下)Hi-C建库正在突破中.........
(3)菲沙基因Hi-C试剂盒(Frasergen Hi-C Kit)近期也将强势登陆,敬请期待!