Q1:代谢组取样一般遵循那些原则?
代表性和一致性:实验组与对照组样本在取材部位、时间、处理过程等方面尽可能保持一致,从而保证实验的可信度。
迅速性原则:在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速,最大限度的缩短样本从采集到实验的时间。
低温原则:样本离体后如有分离步骤应在4℃或冰上等低温条件下进行,并立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,以免样本产生进一步代谢活动。
Q2:代谢组设置多少生物学重复最好?
临床样本N≥30;动物样本N≥10;细胞样本N≥8;植物样本N≥8;微生物样本N≥8(至少为6个重复)。
Q3:转录组通常使用3个重复,与有更多重复的代谢组分析时要注意什么?
转录组通常为3个生物学重复,与代谢组进行关联分析时注意样本对应,有以下几种情况:
(1)转录组与代谢组均作8个以上生物学重复,样本一一对应;
(2)转录组为3个生物学重复,代谢组为8个生物学重复,在做关联分析时默认与转录组的样本相同,若需要代谢组数据均利用上,需提前备注,将代谢组的数据均一化处理再与转录组的数据进行关联分析(均一化处理由于代谢组样本个体差异较大,会屏蔽掉一些差异)。