Q1：三代测序为什么要结合二代测序？
二者侧重点不同，三代测序侧重于分析转录本结构，进行定性分析；而二代测序侧重于基因表达量的检测，进行定量分析。二者研究侧重不同。使用二代结合三代的方式可以进行相互校正，提高分析结果准确性。
Q2：无参考基因组的物种可以进行“3+2”测序分析吗？
对于无参考序列或参考序列不完整的物种，可以将不同组织或不同发育阶段样本等量混合RNA做全长转录组测序，这样可以得到该物种的转录本集合，然后结合二代测序，进行基因表达定量以及差异分析。这样相对于传统的二代得到的转录组de nove而言，结果会更加准确。
Q3：有参物种进行“3+2”会对研究有帮助吗？
对于有参物种可以通过三代全长转录组测序得到该物种的转录本集合，然后与参考基因组进行比对，同时可以结合二代的定量信息，进行后续分析。对可变剪接检测、融合基因鉴定、lncRNA鉴定等都会帮助。
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